MARCADORES INFLAMATORIOS EN LA EVALUACION DE LA MEMBRANA PERITONEAL

INTRODUCCIÓN

La diálisis peritoneal (DP) es una modalidad de tratamiento de sustitución renal crónica (TRR) que preserva mejor la función renal residual, pero la exposición a soluciones dialíticas no biocompatibles pueden dañarla. La evaluación del transporte peritoneal (TP) permite detectar cambios en la membrana.

Test de equilibrio peritoneal (PET) permite evaluar la capacidad de transporte de solutos y agua en pacientes en diálisis peritoneal (Fig 1).

Fig. 1: PET nos da el D/P creatinina y D/D0 glucosa a las 4 horas de la prueba. Permite clasificar el transporte peritoneal (alto, promedio alto, promedio bajo, bajo) y guiar la prescripción de DP.

El estudio seriado de IL-6 y de las subpoblaciones leucocitarias en el líquido peritoneal podría alertar de cambios en la función y estructura de la membrana peritoneal. ¿Es la fibrosis peritoneal la nueva diana terapéutica?

Objetivos

Evaluar la asociación del TP con marcadores inflamatorios en el líquido peritoneal (LP), con factores comórbidos, tratamiento recibido y la evolución, en una cohorte de pacientes en DP. Identificar un biomarcador con capacidad predictiva de cambios en la membrana peritoneal.

MATERIALES Y MÉTODOS

• Estudio: Prospectivo, Observacional, Descriptivo, Multicéntrico.

• Centros/Población: CASMU-IAMP, DPU, HC (25), FOINE (100).

• Criterios de inclusión: $>18\text{ años}$, DP, consentimiento informado.

• Criterios de exclusión: Neoplasias, QT, IS, Embarazo.

Se realiza registro de datos clínicos y de laboratorio mensuales de los pacientes en D/P incluyendo PET. Recolección líquido peritoneal simultáneo con la realización de PET semestral/anual. Obtención de la celularidad total en la bolsa (contador hematológico). Identificación de subpoblaciones leucocitarias en LP por Citometría de Flujo (Facs Canto II). Análisis con Infinicyt (Cytognos).

Fig 2. Ac utilizados en el tubo realizado: HLA-DR V450, CD15 FITC, CD14 PE, CD16 PerCP, CD203c PE-Cy7, CD123 APC, CD11c APC-C770, CD117 APC-R700, CD141 PB, CD3 HV500.

Se procesan las células presentes en una bolsa de DP luego de una permanencia de 12 horas. Se analizan poblaciones celulares por citometría de flujo (CF) y se guardan alícuotas a -20 y -80º C para evaluar luego la presencia de diferentes citoquinas por CF y IL6 por ELISA.

RESULTADOS

Se realizó puesta a punto de la técnica. Se estableció el protocolo de obtención de células para Citometría de Flujo (CF) a partir de LP.

Se realizó CF con diferentes combinaciones de anticuerpos para determinar la presencia de diferentes sub-poblaciones leucocitarias hasta que se estableció el tubo definitivo (Fig 2). Las diferentes subpoblaciones analizadas se ejemplifican en la Fig 3.

• Fig 3. Dot plots ilustrativos de las diferentes poblaciones celulares identificadas en LP por CF (Mastocitos, Basófilos, Neutrófilos, Eosinófilos, Linfocitos T, Monocitos, Célula Dendrítica Plasmocitoide, Células Mieloides).

CONCLUSIONES

El procesamiento de bolsas de DP por CF es una metodología factible.

Se logró la puesta a punto de un protocolo y se establecieron los anticuerpos a utilizar para determinar sub-poblaciones leucocitarias diferentes (mastocitos, Basófilos, eosinófilos, Neutrófilos maduros e inmaduros, Linfocitos T, Linfocitos NK, Precursores, Monocitos, Macrófagos, Células dendríticas Plasmocitoides, Células dendríticas AXL+, Células Dendríticas CD1c).

Al momento nos encontramos analizando datos preeliminares obtenidos de muestras de 25 pacientes.

Esperamos que una vez completado las dos cohortes de pacientes se pueda demostrar una asociación entre las poblaciones estudiadas, las citoquinas inflamatorias y la evolución del transporte en la DP.

Agradecimientos: FOINE, IMAES, Pacientes.

Información de Contacto: veronicamirandamondada@gmail.com