Instalación de la Plataforma de Citometría de Flujo Espectral en el Laboratorio de Citometría del Hospital de Clínicas

Introducción

La citometría de flujo (CF) ha sido fundamental durante 50 años para diagnosticar neoplasias hematológicas y alteraciones del sistema inmune. Una limitación de la citometría convencional es su limitación en analizar un gran número de parámetros simultáneamente, dificultando la caracterización de subpoblaciones celulares y el estudio de muestras raras, como la enfermedad residual o biopsias líquidas. Recientemente, la citometría de espectro completo ha transformado el campo al medir el espectro continuo de fluorescencia de cada fluorocromo y restar la autofluorescencia de la muestra. Esta técnica mejora la identificación de marcadores y aumenta el número de moléculas analizadas simultáneamente, previendo que se convierta en la plataforma estándar de CF clínica en el futuro.

El Laboratorio de Citometría y Biología Molecular del Departamento Básico de Medicina ha sido pionero en el uso de estas tecnologías para diagnosticar patologías hematológicas en el país. Desde la adquisición del citómetro FACS Canto II en 2013 y la adopción de la plataforma Euroflow (8 colores), el laboratorio ha asegurado la reproducibilidad de sus resultados y ha participado en ensayos multicéntricos. Este año, se incorporó un citómetro de flujo espectral de tres láseres Aurora, CYTEK, que permite valorar hasta 24 parámetros simultáneamente.

El objetivo de este estudio fue demostrar que los paneles diagnósticos usados en un citómetro convencional pueden trasladarse con éxito a una plataforma espectral.

Materiales y Métodos

Para ello adquirimos simultáneamente 19 muestras (5 de sangre periférica, 9 de médula ósea y 5 biopsias de ganglio linfático), de pacientes con diagnóstico probable de neoplasia linfoide crónica en el citómetro FACS Canto II y en el citómetro espectral Aurora CYTEK, utilizando el tubo de screening linfoide LST (Euroflow). En ambos citómetros utilizamos los mismos controles de referencia requeridos para la estandarización Euroflow. Adicionalmente se evaluaron 9 muestras de médula ósea para diagnóstico de discrasias plasmocitarias con el tubo de screening PCD. Los datos fueron analizados con el software Infinicyt (Cytognos, BD).

Se compararon los porcentajes de las principales poblaciones de linfocitos T, B y NK, con ambos citómetros, además de evaluar la presencia y porcentaje de poblaciones B y de plasmocitos clonales. Para cada población evaluada se realizaron análisis de regresión lineal y análisis de Bland-Altman para comparar las mediciones de las diferentes poblaciones estudiadas con ambos citómetros con el objetivo de evaluar su concordancia.

Resultados

En 8 de los 19 pacientes evaluados con el tubo LST se diagnosticó una población clonal de células B maduras y en 4 de los 9 pacientes estudiados con el panel PCD se encontró una población de plasmocitos clonales, utilizando el FACS Canto.

En todos los casos la población clonal también fue detectada en el citómetro espectral en porcentajes similares (R² ≥ 0.99 para ambas poblaciones). En cuanto a la valoración del porcentaje de linfocitos T, B normales y células NK, el estudio de regresión lineal mostró valores de R² ≥ 0.99 para todas las poblaciones analizadas (se muestran sólo los datos de linfocitos T).

El análisis de Bland-Altman reveló un sesgo cercano a 0 en todos los casos con límites de acuerdo estrechos a pesar del bajo número de casos estudiados.

Conclusiones

Este trabajo revela el potencial de esta nueva tecnología de análisis por citometría de flujo en nuestro laboratorio. Además, supone adelantarse a la transición que el Consorcio EuroFlow está llevando adelante hacia citómetros con más colores.

Esto abre camino para su uso en el diagnóstico y seguimiento de neoplasias hematológicas, así como el desarrollo de líneas de investigación con esta nueva herramienta en nuestro país.

Es necesaria una validación rigurosa con más cantidad de datos y con otros paneles de anticuerpos.

Referencias

• Robinson JP et al. Flow Cytometry: The Next Revolution. Cells. 2023;12(14):1875. doi: 10.3390/cells12141875.
• Bonilla D et al. Front. Full spectrum flow cytometry as a powerful technology for cancer immunotherapy research. Mol. Biosci., 2021 (7) doi.org/10.3389/fmolb.2020.612801
• Brestoff JR. Full spectrum flow cytometry in the clinical laboratory. Int J Lab Hematol. 2023 (Suppl 2):44-49. doi: 10.1111/ijlh.14098.

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